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豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-4707 豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒
以下是豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理：
一、實驗原理
采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。預(yù)先包被HDL捕獲抗體的微孔板中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記檢測抗體，經(jīng)溫育洗滌后，通過TMB顯色反應(yīng)(藍(lán)色→黃色)測定450nm吸光度，顏色深淺與HDL濃度呈正相關(guān)。
二、樣本處理要求
血清?：采集后1000×g離心10分鐘分離，避免溶血或脂血;
血漿?：EDTA/肝素抗凝，1000×g離心30分鐘去除顆粒;
組織勻漿?：需充分勻漿后離心取上清;
保存?：2-8℃可存7天，長期需分裝于-20℃以下，避免反復(fù)凍融。
三、試劑盒組成
預(yù)包被微孔板
HDL標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度)
HRP標(biāo)記檢測抗體
TMB顯色底物、終止液
洗滌緩沖液(20×濃縮需稀釋)
四、操作步驟
加樣?：
標(biāo)準(zhǔn)品孔：梯度濃度各50μL;
樣本孔：樣本40μL+稀釋液10μL(5倍稀釋);
孵育?：37℃避光溫育60分鐘，封板膜密封;
洗滌?：棄液后加洗滌液靜置30秒，重復(fù)5次，拍干;
顯色?：每孔加TMB底物50μL，37℃避光顯色15分鐘;
終止?：加終止液50μL，15分鐘內(nèi)測定450nm OD值。
五、注意事項
試劑保存?：未使用板條需密封防潮，2-8℃保存;
操作規(guī)范?：
不同批號試劑勿混用;
移液誤差需<2%，避免產(chǎn)生氣泡;
顯色后顏色異常(如深藍(lán)色)需棄用;
質(zhì)量控制?：
批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%;
每批次實驗需同步標(biāo)準(zhǔn)曲線。
六、結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，通過樣本OD值計算濃度。
注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷，以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師。
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